描述

BFH772 是一種口服有效的 VEGFR2 抑制劑，IC50 為 3 nM。

相關類別

研究領域 >> 癌癥

靶點

VEGFR2:3 nM (IC50)

體外研究

BFH772具有高選擇性;除了在3nM IC50下抑制VEGFR2外，它還靶向B-RAF，RET和TIE-2，盡管效力至少低40倍。對于測試的所有其他酪氨酸特異性和絲氨酸/蘇氨酸特異性蛋白激酶，BFH772無活性（IC50>10μM; cKIT>2μM）。 BFH772在CHO細胞中抑制VEGFR2，IC50為4.6±0.6 nM。 BFH772在HUVEC細胞中抑制VEGFR2，IC50為3 nM。 BFH772抑制配體誘導的RET，PDGFR和KIT激酶的自身磷酸化，IC50值在30和160nM之間。 BFH772針對EGFR，ERBB2，INS-R和IGF-1R的激酶以及針對細胞質BCR-ABL激酶的選擇性（IC50值>0.5μM）。 BFH772的IC50（<0.01 nM，n = 2）表明它們在非常低的nM濃度下消除了VEGF誘導的增殖[1]。

體內研究

每天口服一次3mg / kg的BFH772有效抑制黑素瘤生長（原發腫瘤為54-90％，轉移生長為71-96％），如通過**對照比例所示。 BFH772在0.3,1和3 mg / kg時的劑量 - 反應曲線表明即使在*低濃度下，這種萘-1-甲酰胺也能抑制VEGF誘導的組織重量和TIE-2水平，但僅在1 mg / kg時達到統計學顯著性。以上[1]。

激酶實驗

體外激酶測定基于過濾器結合測定，使用在桿狀病毒中表達的重組GST-融合激酶結構域并在谷胱甘肽 - 瓊脂糖凝膠上純化，γ-[33P] ATP作為磷酸供體，和聚（Glu：Tyr 4：1） ）肽作為受體。每個GST融合激酶在優化的緩沖液條件下孵育[20mM Tris-HCl緩沖液（pH 7.5），1-3mM MnCl 2,3-10mM MgCl2,3-8μg/ mL聚（Glu：Tyr 4：1） ，在環境中或不存在測試物質的情況下，在環境溫度下，在30μL總體積中，0.25 mg / mL聚乙二醇20000,8μMATP，10μM釩酸鈉，1 mM DTT]和0.2μCiγ-33P ATP溫度。加入10mL 250mM EDTA終止反應。使用384孔過濾系統，將一半體積轉移到Immobilon-聚偏二氟乙烯膜上。然后將膜徹底洗滌并干燥，并進行閃爍計數。化合物的IC50通過抑制百分比的線性回歸分析計算[1]。

細胞實驗

通過用各種組成型活性酪氨酸激酶的轉導使不同的Ba / F3細胞系呈現IL-3獨立，在含有10％胎牛血清的RPMI 1640培養基中生長。為了維持親本Ba / F3細胞，培養基另外補充10ng / mL白細胞介素-3（IL-3）。對于增殖測定，將Ba / F3細胞一式三份接種于96孔板上，每孔10000個細胞，并與不同濃度的化合物一起孵育72小時，然后使用刃天青鈉鹽染料還原讀數定量活細胞（商業上稱為Alamar Blue測定）。使用XLFit Excel插件使用四參數劑量反應模型[1]確定IC50。

動物實驗

小鼠[1]體重18至20g的雌性FVB小鼠以6只為一組飼養。將含有VEGF（2μg/ mL）的0.5mL 0.8％w / v瓊脂（含有肝素，20U / mL）的多孔腔皮下植入小鼠的側腹（每組n = 6）。 VEGF誘導腔室周圍血管化組織的生長。該反應是劑量依賴性的，可以通過測量組織的重量和TIE-2水平來量化。在植入室之前4-6小時開始每天一次口服化合物或載體（PEG200 100％，5mL / kg）處理小鼠并持續4天。在*后一次給藥后24小時處死動物以測量血管化組織。取組織重量，然后制備用于TIE-2ELISA分析的裂解物。大鼠[1]將導管植入用于BFH772和BAW2881的幼稚雌性大鼠OFA的股動脈和靜脈中，或在雌性Sprague-Dawley大鼠的頸靜脈和股動脈中植入化合物4,9和10的動物。允許恢復96小時，并且被安置在單個籠子中，在整個實驗過程中可以自由獲取食物和水。雌性OFA大鼠接受溶于乙醇/二甲基異山梨醇/聚乙二醇400 / D5W（10/15/35/40 v / v）的2.5 mg / kg BAW2881或溶于N-甲基吡咯烷酮/聚乙二醇200的1 mg / kg BFH772（30 ：70，v / v）通過注入股靜脈。 D5W是葡萄糖5％/水（v / v）。口服給藥：將BAW2881和BFH772配制成微粉化懸浮液（溶于/懸浮在蒸餾水中的0.5％羧甲基纖維素中）并通過強飼法給予雌性OFA大鼠，以給予BAW2881或3mg / kg BFH772 25mg / kg的劑量。 （每組n = 4只大鼠）。對于化合物4,9和10,8周齡的雌性Sprague-Dawley大鼠接受靜脈內劑量3mg / kg 4,9和10，配制成乙醇/ NMP /聚乙二醇400 / D5W（10/10 / 50/30）（每組n = 2只大鼠），或以50mg / kg給藥的0.5％羧甲基纖維素在蒸餾水中的懸浮液（每組n = 3只大鼠）。在規定的時間，將血液樣品收集到肝素化管中，并通過HPLC / MS-MS測定血漿中化合物的量。

參考文獻

[1]. Bold G, et al. A Novel Potent Oral Series of VEGFR2 Inhibitors Abrogate Tumor Growth by Inhibiting Angiogenesis. J Med Chem. 2016 Jan 14;59(1):132-46.

密度

1.4±0.1 g/cm3

沸點

541.2±50.0 °C at 760 mmHg

分子式

C23H16F3N3O3

分子量

439.387

閃點

281.1±30.1 °C

質量

439.114380

LogP

4.37

蒸汽壓

0.0±1.5 mmHg at 25°C

折射率

1.656

6-{[6-(Hydroxymethyl)-4-pyrimidinyl]oxy}-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]-1-naphthamide

1-Naphthalenecarboxamide, 6-[[6-(hydroxymethyl)-4-pyrimidinyl]oxy]-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]-

BFH772